生物化学与分子生物学实验指导（第2版） 下载 pdf 百度网盘 epub 免费 2025 电子书 mobi 在线

本书内容编排系统，逐层深入；内容丰富、翔实，共涵盖了35个实验项目，反映了实验教学改革的成果；写作风格有明显创新，在简要介绍实验原理、材料的基础上，以新颖、独创的表格流程格式，清晰地描述了每个操作步骤的内容、要点(含注意事项、技巧分析)；在结果部分不仅介绍了预期结果，还分析了可能出现的常见问题及处理方法。本书既可作为高等学校生物化学与分子生物学实验教材，又可作为相关专业人员了解、掌握生物化学与分子生物学实验技术的重要参考书。

**篇 生物化学与分子生物学实验概论

第1章 生物化学与分子生物学实验的基本要求

**节 实验室的基本要求

一、实验室规则

二、实验室安全

第二节 实验记录与实验报告的基本要求

一、实验记录

二、实验数据的处理

三、实验误差分析与处理

四、实验报告的要求

第2章 生物化学与分子生物学实验基本技能训练

**节 基本操作技能

一、玻璃仪器的洗涤与干燥

二、溶液的混匀

三、过滤、加热与冷却

第二节 基本器材与仪器的使用

一、刻度吸管的使用

二、可调微量移液器的使用

三、容量瓶的使用

四、电子天平的使用

五、pH计的使用

第3章 生物化学与分子生物学实验样品的制备

**节 样品制备的基本原则与策略

一、生物样品制备的基本原则

二、生物样品制备的基本策略

第二节 常用实验样品的制备

一、血液样品

二、尿液样品

三、组织样品

四、微生物样品

五、植物样品

第三节 生物大分子的制备

一、核酸的分离纯化

二、蛋白质的分离纯化

第二篇 生物化学与分子生物学实验技术的基本原理

第4章 分光光度技术

**节 基本原理

一、光的基本知识

二、朗伯-比尔定律

第二节 分光光度技术的应用

一、定量分析

二、定性分析

三、纯度检测

四、分光光度法的误差

第三节 分光光度计的基本结构及使用

一、分光光度计的基本构造

二、常见分光光度计的使用

三、分光光度计使用的注意事项

第5章 电泳技术

**节 基本原理

一、电泳的原理

二、影响电泳速度的外界因素

第二节 电泳分类

一、按工作原理分类

二、按分离目的分类

三、按用法分类

第三节 常用电泳技术

一、纸电泳

二、醋酸纤维素薄膜电泳

三、琼脂糖凝胶电泳

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳

五、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

六、等电聚焦电泳

七、双向凝胶电泳

八、免疫电泳

九、毛细管电泳

第四节 电泳装置的结构及使用

一、电泳装置

二、使用方法

第6章 层析技术

**节 基本原理

一、层析的基本概念

二、层析的基本原理

三、层析技术的分类

第二节 吸附层析

一、吸附层析的原理

二、吸附层析的分类

三、吸附剂和洗脱剂的选择

第三节 分配层析

一、分配层析的原理

二、纸层析

第四节 离子交换层析

一、离子交换层析的原理

二、离子交换剂的类型

三、离子交换层析的应用

四、离子交换树脂的处理

第五节 凝胶层析

一、凝胶层析的原理

二、凝胶层析的实验技术

三、凝胶层析的应用

第六节 亲和层析

一、亲和层析的原理

二、亲和层析的基本过程

三、亲和层析载体、配体的选择与偶联

第7章 离心技术

**节 离心技术的基本原理

一、离心力

二、相对离心力

三、沉降系数

第二节 离心分离的常用方法

一、沉淀离心法

二、差速离心法

三、密度梯度离心法

第三节 离心机的分类及使用

一、制备型离心机

二、分析型离心机

三、离心操作注意事项及其维护保养

第8章 核酸分子杂交技术

**节 基本原理

一、DNA的变性

二、DNA的复性

三、核酸分子杂交

第二节 核酸探针及其标记

一、核酸探针

二、探针的标记

第三节 常用核酸分子杂交技术

一、固相杂交技术

二、液相杂交技术

三、核酸分子杂交实验条件的优化

第三篇 基本型实验

第9章 蛋白质、氨基酸实验

**节 蛋白质的定量测定

实验1 蛋白质的定量测定（微量凯氏定氮法）

实验2 蛋白质的定量测定（双缩脲法）

实验3 蛋白质的定量测定（Folin-酚试剂法）

实验4 蛋白质的定量测定（BCA法）

实验5 蛋白质的定量测定（考马斯亮蓝染色法）

实验6 蛋白质的定量测定（紫外吸收法）

第二节 蛋白质相对分子量测定（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）

第三节 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量

第四节 氨基酸的薄层层析

第五节 氨基酸的纸层析

第10章 酶学实验

**节 过氧化氢酶米氏常数的测定

第二节 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（赖氏法）

第三节 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制

第四节 乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖电泳法测定

第11章 糖类、脂类实验

**节 血糖的定量测定

实验1 血糖的定量测定（Folin-吴宪法）

实验2 血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）

实验3 血糖的定量测定（己糖激酶法）

第二节 乳酸的定性分析与定量测定

实验1 尿中乳酸含量的定性分析

实验2 血液中乳酸含量的定量测定

第三节 血清甘油三酯的测定（乙酰丙酮显色法）

第四节 血清总胆固醇的测定（胆固醇氧化酶法）

第12章 核酸实验

**节 核酸的定量测定

实验1 核酸的定量测定（定磷法）

实验2 核酸的定量测定（紫外吸收法）

实验3 DNA的定量测定（二苯胺法）

实验4 RNA的定量测定（地衣酚法）

第二节 核酸的琼脂糖凝胶电泳

实验1 DNA的琼脂糖凝胶电泳

实验2 RNA的甲醛变性凝胶电泳

第三节 核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳

第四节 DNA的聚合酶链式反应

第四篇 综合设计型实验

第13章 综合性实验

**节 血清清蛋白、γ-球蛋白的分离纯化与定量

第二节 碱性磷酸酶的分离纯化、比活性测定与动力学分析

实验1 碱性磷酸酶的分离纯化和比活性测定

实验2 底物浓度对碱性磷酸酶活性的影响

实验3 pH对碱性磷酸酶活性的影响

实验4 温度对碱性磷酸酶活性的影响

第三节 肝糖原的提取、鉴定与定量

实验1 肝糖原的提取与鉴定

实验2 肝糖原定量测定

第四节 血清脂蛋白的电泳分离与定量测定

实验1 血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳

实验2 血清高密度脂蛋白-胆固醇的分离与定量测定（磷钨酸-镁沉淀法）

第五节 质粒DNA的提取、定量与酶切鉴定

实验1 质粒DNA的小量提取（碱裂解法）

实验2 高纯质粒小量制备（试剂盒法，离心柱型）

实验3 质粒DNA的定量（紫外分光光度法）

实验4 质粒DNA的酶切鉴定

第六节 基因组DNA的提取、定量与鉴定

实验1 细菌基因组DNA的提取、定量与鉴定

实验2 动物组织基因组DNA的提取、定量与鉴定

第七节 总RNA的提取、定量与逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）

实验1 总RNA的提取与定量

实验2 逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）

第八节 Southern杂交

实验1 基因组DNA样品的限制性酶切

实验2 酶切样品的琼脂糖凝胶电泳

实验3 DNA的变性、转膜与固定

实验4 杂交与杂交后清洗

实验5 杂交结果的检测

第九节 斑点或狭缝杂交

第14章 设计性实验

**节 设计性实验的基本程序

一、选题定题

二、实验设计

三、实验实施

四、实验总结

第二节 生物化学与分子生物学实验设计的基本思路

一、蛋白质研究的实验设计

二、酶学研究的实验设计

三、核酸研究的实验设计

四、糖类的实验设计

五、脂类及维生素的实验设计

第五篇 研究创新型实验

第15章 分子克隆实验

**节 目的基因的分离与载体的选择

实验1 目的基因的分离

实验2 载体的选择

第二节 目的基因与载体的限制性酶切及酶切产物的回收

实验1 目的基因与载体的限制性酶切

实验2 酶切产物的回收

第三节 目的基因与载体的连接

实验1 酶切产物的克隆（T4 DNA连接酶法）

实验2 PCR产物的TA克隆

第四节 重组DNA的导入

第五节 阳性重组体的筛选与鉴定

实验1 阳性重组体的筛选（α-互补法）

实验2 阳性重组体的鉴定（菌落PCR法）

第六节 目的基因的表达及鉴定

第七节 研究创新型实验设计：绿色荧光蛋白（GFP）的基因克隆与表达

附录 生物化学与分子生物学实验试剂的配制与保存及常用数据表

附录A 试剂的配制与保存

一、化学试剂分级及注意事项

（一）化学试剂纯度分级表

（二）试剂配制的一般注意事项

（三）易变质及需要特殊方法保存的试剂

二、常用试剂及溶液的配制

（一）常用清洗液的配制

（二）常用试剂的配制

（三）常用缓冲液的配制

（四）电泳常用缓冲液的配制

（五）常用储存液的配制

三、细菌实验试剂的配制与保存

（一）细菌培养基的配制

（二）抗生素的配制

（三）细菌的保存

附录B 常用数据表

一、常用蛋白质相对分子质量标准数据

二、氨基酸的主要参数

三、核酸、蛋白质换算数据

四、常用核酸相对分子质量标准数据

五、琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的**分辨范围

六、PAGE凝胶配方（核酸电泳用）

七、SDS-PAGE的浓缩胶（5% Acrylamide）配方

八、SDS-PAGE分离胶配方

九、SDS-PAGE分离胶的浓度与**分离范围

参考文献

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前言

生物化学与分子生物学是生命科学的领头学科，其理论和实验技术已广泛渗透到生命科学的各个领域。因此，生物化学与分子生物学的实验技术已经成为揭示生命奥秘的重要工具。

《生物化学与分子生物学实验指导》（第1版）出版后已经在医学本科生及研究生的教学实践中应用了4年，受到在校生及外校师生的欢迎。同时，在教学实践中又发现了书中的一些疏误，因此，本书在第1版的基础上进行了修订，对部分篇章的顺序进行了调整，删除了部分内容，增加了一些实验，对欠妥的内容进行了修正。

本书分五篇（共15章）：①生物化学与分子生物学实验概论篇（第1～3章），包括实验的基本要求、基本技能训练及实验样品的制备；②实验技术的基本原理篇（第4～8章），介绍了生物化学四大实验技术及分子生物学三大核心技术之一的核酸分子杂交（另两项核心技术：PCR和分子克隆，分别融入到第12章、第15章）；③基本型实验篇（第9～12章），分为蛋白质、氨基酸实验，酶学实验，糖类、脂类实验，核酸实验四类编排；④综合设计型实验（第13～14章）；⑤研究创新型实验（第15章，以分子克隆实验为代表）。*后的附录提供了生物化学与分子生物学实验试剂的配制与保存及常用数据表。

本书编写独具特色：①内容编排系统，逐层深入：由理论到实验；实验内容由概论、基本原理到各论；各论中各实验项目分为基本型实验、综合设计型实验、研究创新型实验三个模块。②内容丰富、翔实：共涵盖了32个实验项目，其中既有大量经典、临床与科研的实用实验，又引入了反映实验教学改革成果的自主设计性实验等。③创新的写作风格：在简要介绍实验原理、材料的基础上，以新颖、独创的表格流程格式，清晰地描述了每个操作步骤的内容、要点（含注意事项、技巧分析）；结果部分不仅介绍了预期结果，还分析了可能出现的常见问题及处理方法。这在目前的实验教材中未见先例。因此，本书既是一本高等学校生物化学与分子生物学实验教材，又可作为相关专业人员了解、掌握生物化学与分子生物学实验技术的重要参考书。

对于书中不足之处，敬请广大师生批评指正，以使本书进一步完善。